Après l'école de la rue Blanche et le Conservatoire national d'art dramatique de Paris, Alain Pralon entre à la Comédie-Française le 1er septembre 1965. Nommé sociétaire le 1er janvier 1972, il devient sociétaire honoraire le 1er janvier 2006.

Habile, farceur et moqueur, il réunit d'emblée les qualités d'humour et d'humanité propres aux « valets de grande livret » et incarne tour à tour La Flèche, Covielle, Mascarille, Sganarelle, Pasquin, Frontin, Dandin, Brighella... S'il réussit brillamment dans cet emploi, sa sensibilité, sa verve et son panache s'épanouissent avec des personnages plus nuancés tels que Démétrius dans Le Songe d'une nuit d'été de Shakespeare, Philinthe dans Le Misanthrope de Molière, Cyrano dans Cyrano de Bergerac de Rostand ou encore Figaro dans Le Barbier de Séville et Le Mariage de Figaro de Beaumarchais.

Aussi à l'aise dans le répertoire classique que contemporain, il joue Vitrac, Stoppard, Mirbeau, Ibsen, Tchekhov, Billetdoux, Calaferte, Artaud ou Becque. Il interprète Chrysale dans Les Femmes savantes de Molière mis en scène par Simon Eine en 1998, Ossip dans Le Revizor de Nicolas Gogol mis en scène par Jean-Louis Benoît en 1999. Il participe au succès du Malade imaginaire de Molière mis en scène par Claude Stratz, en 2001, en interprétant Argan. Il joue également Lenz, Léon et Léna de Karl Georg Büchner mis en scène par Langhoff en 2002, Le Jeu d'Adam d'après Adam de la Halle mis en scène par Jacques Rebotier en 2003, Bouli redéboule de Fabrice Melquiot mis en scène par Philippe Lagrue en 2005. Il joue sous la direction de Jacques Lassalle dans Platonov ou le Fléau de l'absence des pères de Tchekhov en 2005 et Il Campiello de Carlo Goldoni, en 2006, et il retrouve Claude Stratz dans sa mise en scène des Grelots du fou de Luigi Pirandello en 2005. Grand lecteur, c'est aussi sans décor ni accessoire qu'il met très régulièrement sa voix au service de textes de Jules Renard (2000), Jonathan Swift (2002), Kateb Yacine (2003), Guy de Maupassant (2004) ou Victor Hugo (2002).

Il met lui même en scène Embarquement immédiat d’Élisabeth Janvier, La Rencontre de Vincennes / Sade et Mirabeau de Raymond Jean, en 2000, Ah, vous voilà Dumas ! d'après les souvenirs dramatiques d'Alexandre Dumas, en 2003. Il joue sous la direction de Laurent Pelly dans Le Menteur de Carlo Goldoni, en 2008/2009, et de Dan Jemmett dans Le Donneur de bain de Dorine Hollier en 2010.

Au cinéma, il joue dans C'est encore loin l’Amérique ? de Roger Coggio (1980), Petits arrangements avec les morts de Pascale Ferran (1994) ou encore Serva Alorosa de Jean Douchet (1994).
Parallèlement, Alain Pralon anime et coordonne à la Comédie-Française les enregistrements de pièces pour France Culture.