Entrée à la Comédie-Française en 1990 ; sociétaire en 1995.

Isabelle Gardien entre à la Comédie-Française le 1er septembre 1990. Elle est nommée 491e sociétaire le 1er janvier 1995. Après avoir fréquenté le Studio 34 et l’école l'Entrée des Artistes sous le regard d’Yves Pignot, elle entre au Conservatoire national supérieur d'art dramatique, en 1986, et fréquente les classes de Pierre Vial, Michel Bouquet, ou Gérard Desarthe. Chanteuse, elle livre, en mai 2008 au Studio-Théâtre, une carte blanche consacrée à l’univers de Kurt Weill et au cabaret des années trente.

Elle a interprété, à la Salle Richelieu, Éliante dans Le Misanthrope de Molière mis en scène par Lukas Hemleb, Béline dans Le Malade imaginaire de Molière mis en scène par Claude Stratz, Le jeune homme, Lise, Aide de camp, Mère Marguerite dans Cyrano de Bergerac de Rostand mis en scène par Denis Podalydès ou encore Sabine dans Le Menteur de Corneille mis en scène par Jean-Louis Benoit et Ophélie dans Ophélie et autres animaux de Jacques Roubaud mis en scène par Jean-Pierre Jourdain au Studio-Théâtre ; Pauline dans L’Élégant Profil d’une Bugatti sous la lune de Jean Audureau sous la direction de Serge Tranvouez au Théâtre du Vieux-Colombier.

Elle participe à l’entrée au répertoire de Place des Héros de Thomas Bernhard, sous la houlette d’Arthur Nauzyciel, interprète Sharon Stone et Mama Binocla dans Bouli Miro de Fabrice Melquiot mis en scène par Christian Gonon ; Bonie dans Les Effracteurs de José Pliya, et Aman dans Esther de Racine mise en scène par Alain Zaepffel.
Isabelle Gardien a également travaillé sous la direction de Jean-Pierre Miquel, Michel Didym, Thierry Hancisse, Jacques Connort, Philippe Macaigne, Simon Eine, Daniel Mesguisch, Marcel Bluwal, Patrick Guinand, ou Charles Tordjman.
Dans les années quatre-vingt-dix, Éric Vignier la met en scène dans Bajazet de Racine et Roger Planchon l’invite à rejoindre les excès chantés d’Occupe-toi d’Amélie de Feydeau, tandis que Georges Lavaudant en fait l’Ophélie de son Hamlet. Elle aura interprété Molière avec Jean-Luc Boutté, Jacques Lassalle ou Dario Fo.

Pour la télévision, elle tourne notamment dans Le Fantôme de la Villette, réalisé par Roger Pigaut et Napoléon et Joséphine, réalisé par Richard Heffron.

Isabelle Gardien est chevalier dans l'Ordre des Arts et des Lettres. Elle a quitté la troupe le 31 décembre 2010.